一、基本原理由一條RNA單鏈轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA(cDNA)稱作“逆轉(zhuǎn)錄”,由依賴RNA的DNA聚合酶(逆轉(zhuǎn)錄酶)來完成。隨后,DNA的另一條鏈通過脫氧核苷酸引物和依賴DNA的DNA聚合酶完成,隨每個(gè)循環(huán)倍增,即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解,留下互...[繼續(xù)閱讀]

    一、基本原理常規(guī)PCR是對終產(chǎn)物進(jìn)行定量和定性分析,而定量PCR(quantitative PCR,QPCR)是對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物進(jìn)行定量和定性分析。廣義概念的QPCR技術(shù)是指以外參或內(nèi)參為標(biāo)準(zhǔn),通過對PCR終產(chǎn)物的分析或PCR過程的監(jiān)測,進(jìn)行PCR起...[繼續(xù)閱讀]

    一、基本原理DNA甲基化是指CpG二核苷酸中的胞嘧啶第5位碳原子被甲基化。DNA甲基化是一種基因外修飾,不改變DNA的一級結(jié)構(gòu);它在細(xì)胞正常發(fā)育、基因表達(dá)模式以及基因組穩(wěn)定性中起著至關(guān)重要的作用。全基因組低甲基化,維持甲基化...[繼續(xù)閱讀]

    一、目的和要求1. 掌握從牛奶中分離酪蛋白的基本原理和操作方法。2. 了解蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的性質(zhì)和應(yīng)用。二、基本原理牛奶中含豐富的蛋白質(zhì),其中主要是酪蛋白。蛋白質(zhì)在其等電點(diǎn)pI溶液中溶解度最低。據(jù)此原理,將牛奶的pH調(diào)至4...[繼續(xù)閱讀]

    蛋白質(zhì)的定量分析是生物化學(xué)和其他生命學(xué)科最常涉及的分析內(nèi)容。蛋白質(zhì)測定的方法很多(見表10-1),需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當(dāng)?shù)姆椒?以滿足不同的要求。下面介紹Folin-酚試劑法、紫外分光光度法、考馬斯...[繼續(xù)閱讀]

    蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在pH值小于其等電點(diǎn)的溶液中,蛋白質(zhì)帶正電荷,在電場中向陰極移動;在pH值大于其等電點(diǎn)的溶液中,蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷,在電場中向陽極移動。血清中含有數(shù)種蛋白質(zhì),它們所具有的可解離基團(tuán)不同,在同一pH的溶液中...[繼續(xù)閱讀]

    一、目的和要求1. 掌握SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)分子量的原理。2. 了解垂直板電泳的操作方法。二、基本原理SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳,是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn)十二烷基磺酸鈉(SDS)。SDS能斷裂分子內(nèi)和分子間氫鍵,破壞蛋白質(zhì)的...[繼續(xù)閱讀]

    一、目的和要求1. 了解離子交換層析的工作原理及操作技術(shù)。2. 學(xué)會用離子交換層析法分離混合氨基酸。二、基本原理離子交換層析是利用離子交換劑上的可交換離子與周圍介質(zhì)中被分離的各種離子間親和力的不同,經(jīng)過交換平衡達(dá)...[繼續(xù)閱讀]

    一、目的和要求1. 掌握從人外周血中提取、分離和純化基因組DNA的基本原理和操作方法。2. 了解人體基因組DNA的特點(diǎn)與用途。二、基本原理人基因組由30億對堿基組成,它包括單倍體細(xì)胞中的全部基因?；虿粌H可以通過復(fù)制把遺傳...[繼續(xù)閱讀]

    一、目的和要求1. 掌握從動物中提取、分離和純化RNA的基本原理和操作方法。2. 了解RNA的生物學(xué)特性及其在研究中的應(yīng)用。二、基本原理細(xì)胞內(nèi)大部分RNA均與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起,以核蛋白的形式存在。因此分離RNA時(shí)必須使RNA與蛋白質(zhì)...[繼續(xù)閱讀]