克隆基因在細(xì)胞中表達(dá)對(duì)于理論研究和實(shí)際應(yīng)用都是十分重要的。在理論研究中,通過(guò)原核和真核系統(tǒng)表達(dá)并純化的蛋白質(zhì)可用于研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能、蛋白與蛋白、蛋白與核酸的相互作用、制備抗體和突變研究等表達(dá)才能探索...[繼續(xù)閱讀]

    原核表達(dá)系統(tǒng)中外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)的基本原理為:將外源基因克隆到表達(dá)載體中,轉(zhuǎn)化到宿主菌-大腸桿菌中表達(dá)。先讓宿主菌生長(zhǎng),Lac Ⅰ產(chǎn)生的阻遏蛋白與Lac操縱基因結(jié)合,從而不能進(jìn)行外源基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),此時(shí)宿主菌正常生長(zhǎng)。...[繼續(xù)閱讀]

    真核表達(dá)系統(tǒng)與原核表達(dá)系統(tǒng)有相似之處,但是與其相比,真核表達(dá)系統(tǒng)也具有自己的特點(diǎn)。真核表達(dá)載體通常還有選擇標(biāo)記、啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄翻譯終止信號(hào)、mRNA加poly A信號(hào)或染色體整合位點(diǎn)等。真核表達(dá)載體通常未穿梭載體,有兩套復(fù)...[繼續(xù)閱讀]

    蛋白質(zhì)印跡法是Western blot分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色,通過(guò)分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞...[繼續(xù)閱讀]

    一、基本原理核酸是以核苷酸為基本組成單位的生物大分子,具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和重要的生物功能。核酸可分為脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic,DNA)和核糖核酸(oxyribonucleic,RNA)兩類(lèi)。DNA由含有A、G、C和T堿基的脫氧核糖核苷酸組成;而RNA由含有...[繼續(xù)閱讀]

    為了定性或定量檢測(cè)目的核酸,在進(jìn)行核酸雜交時(shí),將一段已知序列的核酸作上標(biāo)記,去探測(cè)或追蹤所要研究的目的核酸,這段帶有標(biāo)記的核酸分子被稱(chēng)為探針(probe)。探針的標(biāo)記是核酸分子雜交技術(shù)中重要的環(huán)節(jié)之一。理想的核酸探針?lè)?..[繼續(xù)閱讀]

    分子生物學(xué)研究中常常要對(duì)電泳分離后的DNA進(jìn)行分子雜交,但瓊脂糖凝膠機(jī)械強(qiáng)度不高,容易斷裂,DNA片段容易在凝膠中擴(kuò)散,不適于進(jìn)行雜交操作。1975年,蘇格蘭愛(ài)丁堡大學(xué)E. M. Southern首先提出了將DNA區(qū)帶原位轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上,再...[繼續(xù)閱讀]

    將RNA從瓊脂糖凝膠中轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上雜交,用于檢測(cè)特異性RNA的RNA印跡技術(shù)正好與DNA印跡技術(shù)相對(duì),故被稱(chēng)為Northern印跡雜交(Northern blot)。Northern印跡雜交的基本過(guò)程是:首先,獲得RNA,然后將RNA樣品通過(guò)變性瓊脂糖凝膠電泳加以分...[繼續(xù)閱讀]

    聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)是在模板DNA、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依賴(lài)于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。DNA聚合酶以單鏈DNA為模板,借助一小段雙鏈DNA來(lái)啟動(dòng)合成,通過(guò)一個(gè)或兩個(gè)人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板...[繼續(xù)閱讀]

    一、基本原理原位PCR技術(shù)的基本原理就是將PCR技術(shù)的高效擴(kuò)增與原位雜交的細(xì)胞定位結(jié)合起來(lái),從而在組織細(xì)胞原位檢測(cè)單拷貝或低拷貝的特定的DNA或RNA序列。進(jìn)行原位PCR的待檢標(biāo)本一般先經(jīng)化學(xué)固定,以保持組織細(xì)胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu)...[繼續(xù)閱讀]