DNA體外重組技術(shù)是將目的基因通過DNA連接酶連接在合適的質(zhì)粒上,這種重新組合帶有目的基因的質(zhì)粒DNA叫做重組質(zhì)粒,或重組體,重組質(zhì)?？蛇M(jìn)一步轉(zhuǎn)化細(xì)菌。理論上講,DNA重組技術(shù)很簡(jiǎn)單。當(dāng)用一種限制性內(nèi)切酶切割質(zhì)粒DNA,然后在休外...[繼續(xù)閱讀]

    [1]姜泊,張亞歷,周殿元.分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,1995:15-23.[2]StruhlK.ArapidmethodforcreatingrecomninantDNAmolcules[J].BioTechniques,1985:3:452.[3]鄂征.組織培養(yǎng)和分子細(xì)胞學(xué)技術(shù)[M].北京:北京出版社,1994:299-323.[4]蔡文琴,王伯沄.實(shí)...[繼續(xù)閱讀]

    缺口平移是一種快速、簡(jiǎn)便、成本相對(duì)較低,產(chǎn)生高比活性均一標(biāo)記或高DNA的方法。這種方法可以用來制備序列特異的探針。當(dāng)使用重組質(zhì)粒探針時(shí),雖然任何形式的雙鏈DNA都可以進(jìn)行缺口平移標(biāo)記,但通常使用限制性內(nèi)切核酸酶將插...[繼續(xù)閱讀]

    本方法是使用寡核苷酸引物和大腸埃希菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段來標(biāo)記DNA片段。本法除可替代缺口平移產(chǎn)生均一標(biāo)記的探針外,還在許多方面優(yōu)于缺口平移方法。(1)當(dāng)使用[α-32P]dCTP(比活性1.11×1014Bq/mmol)時(shí),在一個(gè)30min的反應(yīng)中就可以常...[繼續(xù)閱讀]

    體外轉(zhuǎn)錄方法標(biāo)記RNA探針可用商品化轉(zhuǎn)錄質(zhì)粒來制備。這些質(zhì)粒中應(yīng)該包括SP6、T3或T7RNA聚合酶的RNA啟動(dòng)位點(diǎn),而這些啟動(dòng)位點(diǎn)則與多克隆位點(diǎn)(multiplecloningsites,MCS)相鄰。例如質(zhì)粒PGEM-1、pGEM-2、pGEM-3、pGEM-4,pSP65,pSP70,pSP72等(Promega公司)提...[繼續(xù)閱讀]

    一、由寡脫氧核苷酸模板產(chǎn)生RNA探針克隆質(zhì)粒pSP64、pGEM3、pGEM4等(Promega公司)含鄰近于MCS的SP6(其他啟動(dòng)子T7或T3也可利用)RNA啟動(dòng)子,可作為從DNA寡核苷酸模板產(chǎn)生標(biāo)記RNA探針的基礎(chǔ)。所制備的寡核苷酸除了含有雜交序列外,還包括在其...[繼續(xù)閱讀]

    通過缺口平移方法、隨機(jī)引物方法、RNA體外轉(zhuǎn)錄方法、接尾或激酶方法而合成的放射性標(biāo)記探針在標(biāo)記后必須純化,以除去可能干擾雜交反應(yīng)的未摻入標(biāo)記物、酶和鹽。未摻入的標(biāo)記核苷酸能嚴(yán)重引起非特異本底信號(hào)。一般純化標(biāo)記...[繼續(xù)閱讀]

    基因表達(dá)的定位,基因在染色體的定位和某些特殊細(xì)胞類型中病毒序列的存在,都要通過將組織細(xì)胞固定于載玻片上,然后進(jìn)行雜交分析檢測(cè),這樣就可以把這些核酸順序在原有的位置上顯示出來。一般情況下為了保持組織細(xì)胞的正常形...[繼續(xù)閱讀]

    原位雜交組織化學(xué)技術(shù)可以檢測(cè)組織細(xì)胞標(biāo)本中的特異序列。在雜交和顯示雜交信號(hào)以后,組織細(xì)胞可以通過光學(xué)顯微鏡進(jìn)行檢查,可以將雜交信號(hào)定位到特定細(xì)胞。這一雜交技術(shù)非常適用于形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室,并且在其他相關(guān)學(xué)科也有廣...[繼續(xù)閱讀]

    [1]PalopJJ,RobersonED,CobosI.Step-by-stepinsituhybridizationmethodforlocalizinggeneexpressionchangesinthebrain[J].MethodsMolBiol,2011,670(2):207-230.[2]PinaudR,MelloCV,VelhoTA,etal.DetectionoftwomRNAspeciesatsingle-cellresolutionbydouble-fluorescenceinsit...[繼續(xù)閱讀]